期刊简介
本刊是天津医科大学主办的大型综合性学术期刊，是国内外公开发行刊物，国内统一刊号：CN12-1259/R，国际标准连续出版物号：ISSN1006-8147。刊期：季刊，页码：128页(8个印张)。主要栏目有基础医学论著、临床医学论著、报道与交流、个例报告、护理医学、医学综述、医学教育研究等10个栏目。读者对象：医学院校的教师和科研人员，医学教育管理人员，临床教师和科研人员以及中级以上的医护人员等。
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- 杂志名称：天津医科大学学报杂志
- 主管单位：天津市教育委员会
- 主办单位：天津医科大学
- 国际刊号：1006-8147
- 国内刊号：12-1259/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：1999年被评为天津市高校学报一等奖期刊收录：上海图书馆馆藏, 知网收录(中), 维普收录(中), 万方收录(中), 国家图书馆馆藏
人GRP94基因慢病毒载体构建及稳定表达GRP94蛋白的人宫颈癌HeLa细胞株筛选及鉴定
杨娅楠；王媛；左志宇；王鑫廷；杨洁
关键词：葡萄糖调节蛋白94, 慢病毒载体, Hela, SND1
摘要：目的:构建人葡萄糖调节蛋白94(GRP94)基因慢病毒载体,筛选稳定表达GRP94蛋白的人宫颈癌细胞株,筛选GRP94结合蛋白,为探讨GRP94对宫颈癌的调控作用提供细胞模型.方法:采用RT-PCR法从HeLa细胞中扩增GRP94基因片段,连接到慢病毒载体pLVX-IRES-Puro中,获得重组载体.瞬时转染293T细胞,采用Western blot法检测GRP94蛋白表达量.pLVX-FLAG-GRP94重组质粒通过与包装质粒共转染293T细胞,获得重组慢病毒.以慢病毒感染HeLa细胞,筛选并鉴定稳定表达GRP94蛋白的细胞株.用稳定表达FLAG-GRP94的HeLa细胞株,银染后利用质谱筛选结合蛋白,并经免疫共沉淀验证.结果:重组慢病毒载体经双酶切和基因测序比对鉴定正确.HeLa细胞经慢病毒感染、药物筛选后获得的稳定表达株中GRP94蛋白表达量高于野生型HeLa细胞(P＜0.01).成功钓取出一种与肿瘤发生发展密切相关的SND1蛋白.结论:成功构建了GRP94基因慢病毒载体pLVx-FLAG-GRP94,并筛选出稳定表达GRP94蛋白的HeLa细胞株,为进一步明确肿瘤的发生、发展机制奠定了基础.
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