期刊简介
本刊是天津医科大学主办的大型综合性学术期刊，是国内外公开发行刊物，国内统一刊号：CN12-1259/R，国际标准连续出版物号：ISSN1006-8147。刊期：季刊，页码：128页(8个印张)。主要栏目有基础医学论著、临床医学论著、报道与交流、个例报告、护理医学、医学综述、医学教育研究等10个栏目。读者对象：医学院校的教师和科研人员，医学教育管理人员，临床教师和科研人员以及中级以上的医护人员等。
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- 杂志名称：天津医科大学学报杂志
- 主管单位：天津市教育委员会
- 主办单位：天津医科大学
- 国际刊号：1006-8147
- 国内刊号：12-1259/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：1999年被评为天津市高校学报一等奖期刊收录：上海图书馆馆藏, 知网收录(中), 维普收录(中), 万方收录(中), 国家图书馆馆藏
实时定量RT-PCR方法检测豚鼠TSHR免疫BALB/c小鼠甲状腺TSHR的表达
朱云娟；黄丽娟；陈宁；沈炳玲；陆凤先
关键词：外标准法实时定量RT-PCR, TSHR mRNA, SYBR Green I
摘要：目的:建立外标准法SYBR GREEN I实时定量(real-time)RT-PCR方法,以检测豚鼠TSHR分子免疫对BALB/c小鼠甲状腺TSHR mRNA的表达的影响.方法:取正常BALB/c小鼠甲状腺提取甲状腺总RNA,逆转录后进行PCR,得到333 bp扩增产物.经回收纯化后作为real-timePCR的标准品,稀释为106、105、104、103、102、101拷贝,制作标准曲线;并同时进行普通PCR,比较其灵敏度.优化反应条件使溶解曲线有特异扩增.检测豚鼠TSHR分子免疫的BALB/c小鼠甲状腺TSHR mRNA的表达.结果:建立的外标准法SYBR GREEN I实时定量RT-PCR方法可以灵敏的检测到10 copy的核酸,灵敏度为普通PCR的104倍;溶解曲线只有特异峰,溶解温度为82.9℃.没有明显的引物二聚体和非特异峰出现.不同标准点批间变异系数范围为5.8%～14.3%(n=6).与对照组比较,TSHR大分子免疫的BALB/c小鼠甲状腺组织TSHR mRNA水平显著升高(P＜0.05).结论:外标准法SYBR GREEN I实时定量RT-PCR具有灵敏度高,特异性强,重复性好的特点,比普通PCR更精确地检测出小鼠甲状腺组织TSHR mRNA的水平.
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